三叶草种子只能用三叶草族根瘤菌，播种前按照说明规定用量制成菌液洒到种子上并充分搅拌，使每粒种子都能均匀地粘到菌液。种子拌好后应立即播种。用根瘤苗接种的标准比率是每公斤种子用5克细菌。

根瘤接种应注意根瘤菌不能与日光直接接触。因此，拌种应在阴暗、温度不高、不过于干燥的地方进行，拌种后立即播种，如果为了预防某种病害而需拌入化学药品时，因根瘤菌与化学药品接触超过30～40分钟，就会被杀死。在大面积播种时，可将根瘤菌剂与粗麦麸、椐末或其它惰性物质混合，并将其先播种于土壤中。这样，根瘤苗就不会被化学药品杀死。已接种过的种子不能与生石灰或大量的浓厚混合肥料接触，否则也易杀死根瘤菌。